sigma聚乙烯感染/转染试剂(TR-1003-G)

产品介绍：

聚凝胺是一种阳离子聚合物，可以大大提高逆转录病毒或慢病毒感染哺乳动物细胞的效率。它起到中和病毒体与细胞表面之间电荷排斥的作用，从而提高感染效率。逆转录病毒感染的效率在某些细胞中显著提高了 100 到 1,000 倍，这是因为在感染过程中加入了聚凝胺。含有 DMSO 的聚凝胺储液还用于介导 DNA 转移到多种细胞类型中，例如 CHO、鸡胚成纤维细胞、NINH-3T3 和髓样细胞。

产品应用：

一、逆转录病毒感染

1.重组逆转录病毒储液是通过将 5ml 生长培养基（含 5％ 血清）添加接近汇合的转染的逆转录病毒包装细胞单层细胞的 100mm 平板中来制备的。24 小时后，去除培养基，并通过 0.45um 过滤器过滤。

2.将要感染该重组逆转录病毒储液的细胞以每个100mm平板500,000个细胞的量接种在10ml完全培养基中。

3. 24小时后，去除细胞的生长培养基。用2ml的病毒上清液（或将病毒储液稀释至 2ml）感染细胞，每毫升添加5ug至10ug的聚凝胺（最终浓度），在 37°C 下孵育细胞 3 到 6 小时。

加入 8 ml 完全培养基。感染三天后，将细胞按 1：5 的比例分进选择培养基。

二、转染

将细胞铺在完全生长培养基中，约有50％汇合。铺板后18 至24 小时，立即使用以下方法制备DNA-培养基-聚凝胺溶液：(注意：必须按照正确的顺序添加每个组件。)

1. 完全生长培养基（60mm平板，2ml；100mm平板，3ml），加热至37℃。

2. 质粒DNA，10 ng至10 ug。轻轻混合。

3. 聚凝胺的最终浓度为每毫升5ug 至10ug。轻轻混合

4. 从平板中去除培养基，并将DNA-培养基-聚凝胺溶液添加到细胞中。让细胞在 37℃下孵育6到20小时，前6个小时大约每1.5个小时轻轻摇动一次。

5. 去除 DNA-培养基-聚凝胺溶液，并用DMSO 储液轻轻覆盖细胞（在1X HBSS 中的 15％ DMSO：专门培养基每个60 mm平板3 ml，每个100 mm平板4 ml。手动摇动培养皿10秒钟，使溶液均匀分布，然后将细胞置于37℃下温育4分钟。

6. 立即去除DMSO储液，并用完全生长培养基轻轻冲洗细胞两次，每个60 mm培养皿每次洗涤用5 ml，每个100 mm培养皿每次洗涤用10 ml。

7. 将完全生长培养基添加到细胞中。

8. 若要获得稳定的转化子，则去除生长培养基，并将细胞按1：5比例分进选择培养基。

9. 若要瞬时表达，去除生长培养基并添加新鲜的生长培养基。24至72小时后收获细胞和/或培养基。

产品属性：

外形：每毫升无菌超纯水溶解10mg聚乙烯。

储存及稳定性：在-20℃可保存长达2年。

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