CellScript体外加帽RNA转录合成试剂盒(C-SCCS1710)

产品简介：

ScriptCap Cap 1帽子系统提供了ScriptCap帽子酶和ScriptCap 2'-O-甲基转移酶，允许用户在体外转录（IVT）RNA的5'末端上生成Cap 0或Cap 1帽子结构。ScriptCap帽子酶催化体外在主要RNA的5'-三磷酸基团上添加一个帽子核苷酸。"帽子核苷酸"或"帽子"是一种鸟嘌呤核苷酸，通过其5'碳与帽子核苷酸的5'碳结合，后者与主要mRNA转录本的最5'核苷酸的5'碳连接。在大多数真核生物中，帽子核苷酸的7位氮原子是甲基化的。这样的帽子转录本可以表示为：

m'G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3')

其中m7G代表N7-甲基鸟嘌呤帽子核苷酸，ppp代表帽子核苷酸的5'碳和主要RNA转录本的第一个核苷酸之间的三磷酸桥，Nr(pN),-OH(3)代表主要RNA转录本，其中N1是最5'核苷酸。ScriptCap帽子酶依次催化三种不同的酶反应：

（1）RNA三磷酸酶切割RNA的5'三磷酸为二磷酸。

pppN1(p)N.-OH(3')→ ppNi(pN)x-OH(3')+Pi

（2）RNA鸟嘌呤转移酶将GTP连接到RNA最5'核苷酸（N'）的5'二磷酸上。

ppN1(pN)x-OH(3')+GTP→G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3')+PPi

（3）鸟嘌呤-7-甲基转移酶使用腺苷甲硫氨酸（SAM或AdoMet）作为辅酶，催化帽子核苷酸的7-氮原子甲基化。

G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3')+AdoMet → m7G(5')ppp(5')N1(pN)x-OH(3')+ AdoHyc

这个过程被称为“帽子化”，与未帽子化的RNA相比，它可以改善RNA的稳定性和翻译效率。ScriptCap帽子酶构建的带有"帽子0"结构的RNA产物可以通过ScriptCap 2'-O-甲基转移酶与ScriptCap帽子酶一起在体内转录过程中转化为"帽子1"结构的RNA。ScriptCap 2'-O-甲基转移酶通过将SAM分子中的甲基基团转移到帽子0 RNA的倒数第二个核苷酸的2'-O位置来合成带有帽子1结构的RNA。

m7GpppN1(pN)x-OH(3')+AdoMet → m7Gppp[m3'-o]N1(pN)x-OH(3')+ AdoHyc

Cap 0 RNA                                               Cap 1 RNA

帽子1 RNA可以进一步提高mRNA的体内翻译效率，以及帮助标记mRNA为相对于细胞内免疫监视机制的"自身RNA"。

标准的ScriptCap Cap 1帽子系统反应可用于帽子大约60微克的RNA，但反应可以根据用户的需求进行放大或缩小。

ScriptCap Cap 1帽子系统的帽子RNA产品可以直接添加到A-Plus w Poly(A) Polymerase反应（CELLSCRIPT）中，无需事先清洗，以便对帽子RNA的3'末端进行方便的多聚腺苷（poly(A)）修饰，从而合成mRNA。

ScriptCap Cap 1帽子系统提供了一种选择，用于通过共转录帽子化的方式在IVT反应中制备帽子RNA，其中帽子模拟物（例如m7GpppG）代替了部分GTP。只要RNA的5'末端不结构化，使用ScriptCap Cap 1帽子系统的帽子化效率可以接近100%。与此相反，由于帽子模拟物与GTP竞争启动RNA聚合酶的转录，共转录帽子化效率受到帽子模拟物浓度以及与GTP浓度的比例的限制。因此，在转录反应中使用帽子模拟物帽子化的RNA百分比总是小于100%。共转录帽子化具有益处，如果要帽子化的RNA具有高度结构化的5'末端。

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