一、蛋白质磷酸化概念介绍

蛋白质磷酸化是调节蛋白质功能所需的常见翻译后修饰，在细胞中很常见，对于蛋白质分子的激活或失活是必需的，特别是在影响代谢途径或过程的酶中很常见，这也使得磷酸化蛋白质的研究得到越来越多的关注，磷酸化蛋白研究的内容主要包括磷酸化蛋白的鉴定、水平以及作用等，其中，磷酸化蛋白的鉴定是需要首要解决的问题。

磷酸化蛋白的鉴定与天然蛋白（非磷酸化蛋白）的鉴定在内容和方法上都存在差异：磷酸化蛋白鉴定主要是验证蛋白是否发生磷酸化、鉴定发生磷酸化的氨基酸位点以及发生磷酸化的蛋白质的含量。天然蛋白的鉴定就是对蛋白质进行定性（如蛋白质分子质量、氨基酸序列、结构及其他理化性质）和定量鉴定。其次，在鉴定方法上，除了利用普通的蛋白鉴定方法（如质谱法）外，还可通过特定的磷酸化蛋白鉴定方法进行鉴定，如蛋白印迹法（Western Blot）、酶联免疫吸附分析（ELISA）、细胞内流式细胞术和免疫细胞化学/免疫组织化学（ICC/IHC）技术等。

二、Wako蛋白质磷酸化产品Phos-tag™ SDS-PAGE凝胶介绍

Phos-tag™ SDS-PAGE通过电泳，根据磷酸化水平不同，可分离磷酸化和非磷酸化蛋白。分离后凝胶可用于染色、Western blotting和质谱分析（MS）等后续实验。Phos-tag™SDS-PAGE凝胶，只需在配胶过程中加入Phos-tag™分子与Acrylamide结合而成的Phos-tag™Acrylamide和二价金属（MnCl2或ZnCl2）即可进行实验。

三、Phos-tag™ SDS-PAGE凝胶产品特点

★  产品应用与氨基酸残基的种类和位置无关

・ 可用于未知磷酸化蛋白的磷酸化分析 

・ 可用于检测新的磷酸化位点

★  磷酸化位点具有不同数目和位置的磷酸化形式也可以分离

・ 可以确定磷酸化水平，以及磷酸化形式的数量

★  同时检测磷酸化和非磷酸化蛋白

・ 可以定量多种磷酸化形式 

・ 轻松判断有无磷酸化现象发生

★  无放射性和特殊仪器需求（有SDS-PAGE相关试剂和设备即可）

・ 实验简便且低成本

★ 电泳后可进行WB，MS以及二维电泳分析

・ WB：结合内参进行蛋白分析

・ MS：确定不同磷酸化形式的磷酸化位点组合

・ 二维凝胶电泳：具有相同等电点或分子量的磷酸化形式也可以进行分离

四、Phos-tag™ SDS-PAGE凝胶产品应用

1. 应用案例：～α-casein 随时间变化的去磷酸化反应

～α-casein经过碱性磷酸酶处理，将去磷酸化处理的样品，通过Phos-tag™SDS-PAGE或常规SDS-PAGE检测其随时间的变化（温育时间：0-120 min）。

2. WB实例

样品：大鼠脑提取液

检验：抗p35抗体 

条带1：孵育前的大鼠脑提取液 

条带2-5：用MC或ATP孵育（+），未孵育（-） *Microcystin：微囊藻毒素（一种磷酸酶抑制剂）

3. 应用总结

五、Wako蛋白磷酸化Phos-tag™产品推介