Micro Total RNA Rapid Extraction Kit with DNase I
简石生物微量总RNA快速提取试剂盒(TR150)
热线电话: 400-888-3135
热线电话: 400-888-3135
产品介绍
产品简介：
简石生物微量总RNA快速提取试剂盒(TR150)是一种提取高质量总RNA(> 17 nt)的快速方法，适用于细胞(动物、颊黏膜、白细胞，革兰氏阴性细菌)和易于裂解的软组织。可以将smalRNA(例如17-200nt的tRNA、micrORNA)和或large RNA(>200 nt)分离为两个不同的部分。该过程使用独特的核酸纯化柱技术,可得到高质量的总RNA(包括小/micrORNA),可用于NGS、RT/GPCR杂交等应用。
产品特点：
★ 适用于从细胞、组织、酵母菌、植物或者细菌中提取到总RNA(包括small/micrORNAS);
★ 可从少至1个细胞中提取到micrORNA，提取到的RNA不含DNA，并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。
产品操作步骤：
RNA的分离包括俩个步骤：(Ⅰ)样品前处理(样品裂解/均质化)；(Ⅱ) RNA纯化。注意：确保RNA提取过程是在一个无Rnase的环境中。
(Ⅰ)样品前处理
1. 样品裂解/匀浆
样品种类 | 样品量 | 需添加量RNA裂解液 | (Ⅰ)样品前处理(样品裂解/匀浆) | |
细胞 | 悬浮动物细胞培养 | ≤105细胞 | ≥100µl | 离心沉淀细胞/直接在培养皿中裂解 方案1：离心细胞悬液，以≤ 500xg的离心速度离心1分钟，去除上清后用适量RNA裂解液反复吹打来重悬裂解细胞。 方案2：单层贴壁细胞，可在培养皿中直接裂解。每1cm2培养表面积加入100 μI RNA裂解液。(容器体积≤6cm2)室温放置3min。 注意：贴壁培养细胞通常不能完全从培养瓶(皿)脱落，这并不意味裂解不完全，此时细胞膜已完全破裂开，核酸已释放。 |
≤106细胞 | ≥300µl | |||
贴壁动物细胞培养 | ≤5x106 | ≥600µl | ||
革兰氏 （-）菌 | ≤106 | ≥600µl | ||
组织
动植物，新鲜/冷冻样品 | 哺乳动物 | ≤5 mg | ≤600µl | 液氮研磨/样品破碎仪(垂直震荡低温款) 方案1：将组织在液氮里迅速研磨成粉末，再添加600 µlRNA裂解液，室温放置3-5min。 方案2：添加600 μIRNA裂解液，配合样品破碎仪(垂直震荡低温款)+裂解珠(2.0 mm),机器处理程序如下: 动物组织:(60Hz，45s/周期×1) 植物/昆虫:(60Hz ，45-60s/周期×2) |
植物/种子/昆虫 | ≤5 mg | ≤600µl | ||
微生物 | 细菌//酵母/粪便/土壤 | ≤106 | ≥600µl | 样品均质仪(“8”字旋转低温款)+裂解珠(0.5 mm&0.1mm)机器处理程序:(6m/s ，30s/周期x2) |
液体样品 | 血浆/血清/白细胞/脑脊液等 | ≤200ul | 600µl | 液体样品中加入3倍体积的RNA裂解液，混合均匀室温放置3min |
难裂解的样品 | 组织/酵母/植物等 | 可以使用液氮研磨 /研磨仪(垂直或“8”字低温款)，配合蛋白酶K和裂解珠(不同样品选配)，并在RNA裂解液中添加一定浓度的B-巯基乙醇。 | ||
DNA/RNA 保护剂 | 中的组织/细胞 | 100µl | 100µl | 添加了DNA/RNA保护剂的匀浆样品放到室温下(无需去除保护剂)，添加1倍体积的RNA裂解液、混匀室温放置3min |
RNAlater | 中的组织/细胞 | 首先去除RNAlaterTM，只保留样品。 然后参考上述对应的样品前处理方案。 | ||
2. 样品裂解匀浆完成后，需要去除沉淀物
此步骤主要是针对动植物组织和细胞，对于样品量很低(细胞数≤106)则无需此步上述匀浆裂解后的混合物放置在合适容器中，离心1分钟(离心力>12,000xg)，将上清移至干净的离心管中。(注意:移液过程避免吸取到底部杂质)
(II)RNA纯化
以下离心力均在10,000-16,000xg范围内进行。
1. 加入等体积(95-100%)的无水乙醇到上一步含有RNA裂解液的上清中混匀；
2. 将上述混合物放入套在收集管上的1号C纯化柱里，离心1分钟。去除滤出液；
3. 柱上DNasel消化处理(可选)此步骤主要是为了去除痕量的DNA；
a) 添加400µl的RNA洗涤液到1号C纯化柱里离心1分钟，去除滤出液；
b)对于每一次的样品处理需要制备40µl的DNasel反应液。配比为DNase15µl、DNA消化液35µl；
c)直接添加40ul的DNase l反应液到1号C纯化柱上，在室温下(20-30°C)孵育15分钟；
4. 添加400ul的RNA预洗液到1号C纯化柱里，离心1分钟，去除滤出液；
5. 添加700ul的RNA洗涤液到1号C纯化柱里，离心1分钟，去除滤出液；
6. 添加400ul的RNA洗涤液到1号C纯化柱里，离心2分钟，去除滤出液；
7. 添加400μl的RNA洗涤液到1号C纯化柱里，离心2分钟，去除滤出液；
8. 空转2分钟以去除残留的乙醇，以免抑制下游反应；
9. 取出1号C纯化柱，放入一个无RNA酶的离心管中，在吸附膜的中间部位加15ul RNase-freewater(事先在65-70℃水浴中加热效果更好)，室温放置2分钟，离心1分钟洗脱RNA。
产品订购：
货号 | 产品名称 | 规格 |
TR150-10 | 微量总RNA快速提取试剂盒（含DNase I) | 10次 |
TR150-50 | 微量总RNA快速提取试剂盒（含DNase I) | 50次 |
TR150-200 | 微量总RNA快速提取试剂盒（含DNase I) | 200次 |
TR150-D-50 | 微量总RNA快速提取试剂盒（含DNase I) | 50次含Dnase I |
TR150-D-200 | 微量总RNA快速提取试剂盒（含DNase I) | 200次含Dnase I |
