简石生物尿液DNA提取试剂盒—离心柱(TD361)

产品简介：

简石生物尿液DNA提取试剂盒—离心柱(TD361)是一种创新产品，旨在快速、可靠地从40ml的尿液中分离细胞DNA/cell-free DNA。该产品具有独特配制的尿液DNA稳定剂，也可作为沉淀试剂。采集尿液后，通过添加尿液稳定剂（UCB)，总体（细胞和cell-free）或无细胞尿液可以在室温下保存长达一个月。准备提取尿液DNA时，只需加入纯化珠，振荡并离心以收集沉淀物。沉淀后，化学裂解和酶消化用于从沉淀物中提取DNA。随后使用核酸纯化柱IC-S对DNA进行纯化和浓缩。使用尿液DNA提取试剂盒分离的尿液DNA非常适合于qPCR、芯片、甲基化分析和其他下游应用。

产品操作步骤：

从≤40ml 的样品中提取 DNA

除非特殊说明，一般在常温(15-30℃)进行以下操作步骤。以下操作步骤分 3 个部分：

(A)总DNA(细胞内和游离)沉淀；(B)蛋白消化；(C)DNA 纯化。

(A)总DNA(细胞内和游离)沉淀

1. 将 40ml的尿液转移到合适的离心管内；

注：如果处理≤1毫升的尿液，请使用微离心管；

如果处理>1毫升至14毫升的尿液，请使用15毫升的锥形管；

如果处理>14毫升至40毫升的尿液，请使用50毫升的锥形管。

2. 添加 70μl 的尿液稳定剂到每 1ml 的样品中，涡旋混匀。(例如350 μl的尿液稳定剂到 5ml 的尿液样品中)，添加了稳定剂的尿液可以在室温下最长保存1个月，需要提取核酸时，将添加了稳定剂的尿液涡旋振荡，混匀；

3. 如果处理≤14ml 的尿液添加 10μl 纯化珠(使用之前需要涡旋混匀)，如果处理 14-40ml的尿液，需要添加 20μl纯化珠(使用之前需要涡旋混匀)；

4. 在 3，000xg 下离心 15 分钟，收集细胞沉淀；

(B) 蛋白消化

5. 不要搅动细胞沉淀，缓慢倒出或去除上清，大约保留 100-400μl的沉淀物；

建议：如果尿液处理量在 15-40ml 之间，大约应保留 200ml 沉淀物；

注意：您可以通过向沉淀物中加入去DNase/RNase水来调整体积为100-400微升。

6. 向上述沉淀物中加入相同体积的尿液细胞消化液(例如，向200μl沉淀物中加入200μl尿液细胞消化液)。通过移液吹打或振荡将沉淀物充分重悬；

7. 添加 5%(v/v)的蛋白酶 K到重悬的细胞沉淀中。(例如20μl蛋白酶K到 400μl 混合物中)，涡旋混匀，在 55℃下孵育 30 分钟；

(C) DNA 纯化(所有离心步骤均在>16，000 xg 下进行，除非特殊说明)

8. 添加1倍体积的基因组 DNA 裂解液到消化完后的混合液中。(例如，添加 420μl的基因组 DNA 裂解液到420μl消化后的混合液中。)；

9. 将全部样品转移到 1号C-S 中，1号C-S 套在一个收集管里。离心1分钟后去除滤出液。(如果样品体积超过800μl需要反复填充，因为柱子最大容积为800μl）；

10. 将 1号C-S 套在 1 个新的收集管里；

11. 添加 200μl的尿液洗涤液 1 到 1号C-S 中，离心 1 分钟，去除滤出液；

12. 添加 700μl 的尿液洗涤液 2 到 1号C-S 中，离心 1 分钟，去除滤出液；

13. 添加 200μl 的尿液洗涤液 2 到 1号C-S 中，离心 1 分钟，去除滤出液；

14. 将 1号C-S 移至干净的 1.5ml 离心管中,直接添加≥10μl 的 DNA 洗脱液到柱基质上(洗脱液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好)。室温下放置 3-5 分钟，全速离心 1 分钟来洗脱 DNA。

所洗脱的DNA可立即使用或在≤-20℃C下储存以备将来使用。

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